A.  動物保護(hù)組織的倫理；

 

    B. 動物實驗方法的不確定性：在藥效學(xué)試驗中，90%以上經(jīng)過動物 實驗證實有效的藥物，在臨床試驗中沒有獲得肯定的結(jié)果。在藥物的臨床前安全評價中，由于種屬差異的限制，很多實驗結(jié)果（如免疫原性/免疫毒性，致癌試驗，生殖毒理等）沒有臨床實驗的指導(dǎo)意義。缺乏理想的動物模型，本身的任何結(jié) 果都存在不確定性，使動物實驗的價值降低。

 

    C. 經(jīng)濟(jì)成本和運(yùn)營的要求：在藥物的臨床前安全評價中，用于購買動物和實施動物實驗的費(fèi)用占整個安評費(fèi)用的50%。動物實驗的周期長，運(yùn)營效率低，延誤臨床試驗和上市時間，使藥物的成本增加。

 

    D. 替代實驗方法的發(fā)展；

 

    E. 國際接軌

 

    4、推行替代方法的困難：

 

    科學(xué)上：

 

    ① 避免使用動物與科學(xué)研究的需要相矛盾時，替代方法的任何理由都不具備挑戰(zhàn)價值。

 

    ② 3Rs本身存在有缺陷，缺乏可操作性。

 

    人類倫理上：

 

    ① 盡管動物實驗的價值具有不確定性，但是，它是為了保護(hù)人類健康或臨床前毒理學(xué)研究和安全評價中，所能利用的終結(jié)工具。

 

    ② 任何政府的政策都不會為了保護(hù)動物而增加人類的危險，或承擔(dān)潛在的責(zé)任。

 

    5、3Rs的主要方法和技術(shù) -  體外 in vitro & 電腦模型 in silico

 

    替代Replacement：

 

    組織培養(yǎng)Tissue culture

 

    離體器官灌注Perfused organs

 

    組織切片Tissue slices

 

    細(xì)胞組分Cellular fractions

 

    亞細(xì)胞組分Subcellular fractions

 

    減少Reduction：

 

    計劃和實施過程中正確選擇實驗策略；

 

    控制實驗中使用動物的變化；

 

    仔細(xì)設(shè)計和分析實驗；

 

    計算機(jī)信息。

 

    優(yōu)化Refinement：

 

    非侵入式技術(shù)Non-invasive techniques；

 

    減輕疼痛的麻醉和鎮(zhèn)痛方案；

 

    訓(xùn)練動物在實驗過程中主動配合；

 

    動物住宿和環(huán)境條件優(yōu)渥。

 

    6、替代方法的現(xiàn)狀：

 

    研究進(jìn)展與相關(guān)投入： 各個發(fā)達(dá)國家研究成果頻繁報道，相關(guān)投入有增加趨勢。我國提倡替代方法科學(xué)家認(rèn)為，如不迎頭趕上，會受到相關(guān)研究技術(shù)壁壘的影響。

 

    各國使用動物數(shù)量： 沒有減少，甚或增加，而且，不但數(shù)量增加，內(nèi)涵更加復(fù)雜，如轉(zhuǎn)基因動物模型。

 

    各國、各地區(qū)相關(guān)組織及法規(guī)： 在發(fā)達(dá)國家，只要涉及動物實驗的內(nèi)容，包括民間和政府機(jī)構(gòu)，在其指南中，都會有接受替代方法理念的陳述，但是，對于實施細(xì)則和步驟、時間表等， 均沒有強(qiáng)硬規(guī)定。（化妝品除外）

 

    中國：2015年中國毒理學(xué)會主辦了第一屆毒性測試替代方法與轉(zhuǎn)化毒理學(xué)（國際）學(xué)術(shù)研討會，此后每年舉辦一次，今年將于10月9-12日在廣州召開第四屆研討會。但農(nóng)藥登記方面，并沒有相應(yīng)法規(guī)要求用替代方法。

 

    印度：只有化妝品注冊時用OECD 442B進(jìn)行皮膚致敏實驗。農(nóng)藥登記領(lǐng)域沒聽說CIB有關(guān)于替代方法的要求。

 

    墨西哥：農(nóng)藥登記中，COFEPRIS僅接受使用哺乳動物進(jìn)行的毒理實驗（體內(nèi)）。

 

    美國：2018年4月10日，EPA官員發(fā)布消息稱，化學(xué)品和農(nóng)藥生產(chǎn)者可以提交不使用實驗動物的皮膚致敏性研究報告用于登記申請。 替代實驗包括2種細(xì)胞實驗，1種in chemico assay，可聯(lián)合使用，以替代局部淋巴結(jié)測定（LLNA，此法將受試化學(xué)品或農(nóng)藥施于小鼠耳朵上）。

 

    阿根廷：替代方法已用于化妝品注冊領(lǐng)域，但在農(nóng)化領(lǐng)域，SENASA短期內(nèi)不會接受新的體外測試方法，只有皮膚致敏實驗指南OECD 406有可能會用OECD 442代替。

 

    巴西：最早于2014年提出毒性測試替代方法的要求并于2016年做了補(bǔ)充，要求實驗室在5年之內(nèi)逐步采用替代方法。

 

    以下重點介紹巴西的毒性測試具體替代方法

 

    巴西的科技創(chuàng)新部于2014年9月24日承認(rèn)了國家動物控制委員會（CONCEA）發(fā)布的動物實驗毒性測試替代方法規(guī)范（Normative resolution No. 18），并要求巴西境內(nèi)的實驗室在5年內(nèi)逐步替換或采用這些替代方法。

 

    該規(guī)范中列出了17種替代方法，分為7個組。

 

    第一組：皮膚刺激性/腐蝕性
 

 

    第二組：眼睛刺激性/腐蝕性

 

 

    第三組：光毒性 Phototoxicity

 

    OECD TG 432：in vitro 3T3 NRU Phototoxicity test 化學(xué)品體外3T3中性紅攝取光毒性試驗方法

 

    第四組：皮膚吸收 dermal absorption

 

    OECD TG 428：Skin absorption: in vitro method 皮膚吸收：體外法

 

    第五組：皮膚致敏性

 

 

    第六組：急性經(jīng)口
 

 

 

    第七組：遺傳毒性genotoxicity

 

 

    國家動物控制委員會（CONCEA）于2016年8月18日發(fā)布了第二批替代方法規(guī)范（Normative resolution No. 31），該規(guī)范中列出了新增的7種替代方法，分為4個組。

 

    第一組：眼睛刺激性/腐蝕性
 

 

 

    第二組：皮膚致敏性
 

 

 

    第三組：繁殖毒性
 

 

    第四組：評估注射產(chǎn)品熱原污染（contaminação  pirogênica em produtos injetáveis）

 

    Bacterial endotoxin test 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（巴西藥典Brazilian Pharmacopeia）。

 

    關(guān)于以上替代方法，巴西相關(guān)政府部門也指出，沒有一種單一的體外替代方法能完全取代動物實驗的方法。不過，利用分階段測試戰(zhàn)略，聯(lián)合使用替代方法可能會逐步取代動物的體內(nèi)實驗。